论著
许芳根, 姜美兰, 熊丽玲
目的 观察miR-31-3p对重症急性胰腺炎(SAP)肠道屏障功能的影响,并探讨其分子机制。方法 将SD大鼠分为假手术组、SAP组、miR-31-3p antagomir组、ML7组,每组12只。采用牛磺胆酸钠逆行注射诱导SAP大鼠模型。ELISA法检测大鼠血清炎症因子,鲎试剂显色法测定内毒素(ET)、酶学分光光度法测定D-乳酸(DLA)、双抗体夹心法测定二胺氧化酶(DAO)以及EPS-G7底物法测定淀粉酶(AMY)的含量,蛋白免疫印迹法(WB)检测大鼠肠道组织相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因检测miR-31-3p对靶基因CHMP4B的作用。将Caco-2细胞分为Control组、LPS组、LPS+miR-31-3p mimic组、LPS+miR-31-3p inhibitor组,采用LPS诱导肠上皮屏障损伤模型。测定Caco-2细胞的TEER、Papp及相关蛋白表达。结果 与假手术组相比,SAP组TNF-α、IL-6、IL-1β水平,ET、DLA、DAO、AMY,MLCK、p-MLC2蛋白表达均明显升高,IL-10水平,ZO-1、Claudin-1蛋白表达明显降低(P<0.05);与SAP组相比,miR-31-3p antagomir组、ML7组TNF-α、IL-6、IL-1β水平,ET、DLA、DAO、AMY,MLCK、p-MLC2蛋白表达均明显降低,IL-10水平,ZO-1、Claudin-1蛋白表达均明显升高(P<0.05)。与Control组相比,LPS组、LPS+miR-31-3p mimic组、LPS+miR-31-3p inhibitor组TEER均明显降低(P<0.05),LPS组、LPS+miR-31-3p mimic组Papp明显上升(P<0.05);与LPS组相比,LPS+miR-31-3p mimic组TEER明显降低、Papp明显上升(P<0.05),LPS+miR-31-3p inhibitor组TEER明显升高、Papp明显降低(P<0.05)。与Control组相比,LPS组MLCK、p-MLC2蛋白表达水平明显升高(P<0.05),ZO-1、Claudin-1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与LPS组相比,LPS+miR-31-3p mimic组MLCK、p-MLC2蛋白表达水平明显升高(P<0.05),ZO-1、Claudin-1蛋白表达水平明显降低(P<0.05),LPS+miR-31-3p inhibitor组MLCK、p-MLC2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),ZO-1、Claudin-1蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论 抑制miR-31-3p能够改善重症急性胰腺炎肠道屏障功能损伤,其分子机制与miR-31-3p靶向CHMP4B调控MLCK/p-MLC2信号通路有关。